Page 20 - ภาพนิ่ง 1

14 วารสารการแพทย์แผนไทยและการแพทย์ทางเลือก ปีที่ 10 ฉบับที่ 1 มกราคม-เมษายน 2555

Staphylococcus aureus ATCC6538 และ อบไอร้อน บดตัวอย่างให้ละเอียดแล้วผสมกับ
Staphylococcus epidermidis ATCC12228 เมทานอลหรือเอทานอล ด้วยอัตราส่วน สมุนไพร

อาหารเลี้ยงเชื้อชนิด Nutrient broth (NB) ต่อตัวทำละลาย เท่ากับ 1 ต่อ 4 หมักที่อุณหภูมิ
3. การทดสอบฤทธิ์ต้านเชื้อแบคทีเรีย ห้องเป็นเวลา 24 ชั่วโมง กรองด้วยกระดาษกรอง
ของสารสกัดจากสมุนไพร Whatman เบอร์ 4 เก็บส่วนสารละลายไว้ ทำซ้ำ
®
3.1 อาหารเลี้ยงเชื้อชนิด Nutrient อีก 2 รอบ แล้วนำสารละลายทั้งหมดทำให้เข้ม
agar (NA) ข้นด้วยเครื่องระเหยภายใต้สูญญากาศ ได้สารข้น

3.2 อาหารเลี้ยงเชื้อชนิด Muller หนืด เก็บไว้ที่อุณหภูมิ -20 องศาเซลเซียส
Hinton broth (MHB) สารสกัดจากข้อ 1.1 และ 1.2 จะ

3.3 ไอโอโดไนโตรเตตระโซเลียม ละลายในสารละลายไดเมทิลซัลฟอกไซด์ร้อยละ
คลอไรด์ (Iodonitrotetrazolium chloride) 1 และกรองผ่านแผ่นกรองที่ผ่านการฆ่าเชื้อขนาด
3.4 Cork borer 0.2 ไมครอน ก่อนนำไปใช้

3.5 คลอแรมเฟนิคอล (Chloram- 2. การทดสอบฤทธิ์ต้านเชื้อแบคทีเรีย
phenicol) Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae,

Staphylococcus epidermidis และ Staphy-
วิธีการ lococcus aureus ของสารสกัดสมุนไพร
1. การสกัดสารจากสมุนไพร 2.1 การเพาะเลี้ยงแบคทีเรียแต่ละ

นำสมุนไพรสดทั้ง 7 ชนิด มาล้างให้ ชนิดในอาหารเลี้ยงเชื้อชนิด Nutrient broth ที่
สะอาดผึ่งให้แห้งในที่ร่ม แล้วนำไปสกัดดังนี้ ความเร็วรอบการเขย่า 200 รอบต่อนาที เป็น

1.1 การสกัดสมุนไพรด้วยน้ำ เวลา 12 ชั่วโมง ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส
นำสมุนไพรสดมาหั่นเป็นชิ้นเล็ก ๆ สกัด 2.2 การตรวจสอบฤทธิ์ของสารสกัด
ด้วยน้ำในอัตราส่วนสมุนไพรต่อน้ำ เท่ากับ 1 ต่อ ด้วยวิธี Agar well diffusion

17
4 นำไปต้มที่ 100 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 10 วิธี Agar well diffusion ดัดแปลงจาก
นาที กรองด้วยผ้าขาวบางแล้วกรองด้วยกระดาษ Rauha et al., 2000 โดยนำแบคทีเรียที่เลี้ยง

®
กรอง Whatman เบอร์ 4 เก็บตัวอย่างที่จะ ในข้อ 2.1 จำนวนเซลล์ 10 CFU/ml มาเกลี่ยให้
8
ทดสอบไว้ที่ -20 องศาเซลเซียส ทั่วบนอาหารเลี้ยงเชื้อชนิด Nutrient agar ด้วย
1.2 การสกัดสมุนไพรด้วยเมทานอล sterile cotton swab จากนั้นเจาะหลุมขนาด

และเอทานอล เส้นผ่านศูนย์กลาง 8 มิลลิเมตร ด้วย Cork
นำสมุนไพรสดมาหั่นเป็นชิ้นเล็กๆ อบ borer แล้วเติมสารสกัดสมุนไพรความเข้มข้น

ให้แห้งที่อุณหภูมิ 50 องศาเซลเซียส โดยใช้เครื่อง 300 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร ปริมาณ 100