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Journal of Thai Traditional & Alternative Medicine Vol. 8 No. 1 January-April 2010 ÛÒ

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®“°π—Èπ∑”°“√ °—¥¥’‡ÕÁπ‡Õ¥â«¬«‘∏’ CTAB μ“¡«‘∏’¥—¥·ª≈ß (ISSR) Òˆ ‰æ√‡¡Õ√剥ⷰà (CT) G, (AG) T, (CT) A,
6
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®“°«‘∏’¢Õß Doyle and Doyle ¥—ߢ—ÈπμÕπμàÕ‰ªπ’È (GA) TC, (AC) CG, (CT) AG, (GT) C, (GA) G, (AC) G,
8 8 8 8 8 8
‡μ‘¡ “√≈–≈“¬∫—ø‡øÕ√å 2X CTAB extraction ˜ (AG) C, (GA) GT, (AC) CG, (GA) GT, (AC) GA,
8 8 8 8 8
‰¡‚§√≈‘μ√ ≈߉ª„πÀ≈Õ¥¡’ºß‡ âπ„¬∑’Ë∫¥≈–‡Õ’¬¥, π”À≈Õ¥ (GC) CG, ·≈– (GT) CG. Õߧåª√–°Õ∫¢Õß “√‡§¡’„πªØ‘°‘√‘¬“
8 8
‰ª‡¢¬à“‡æ◊ËÕ„Àâ “√≈–≈“¬º ¡°—π¥â«¬‡§√◊ËÕß vortex mixer, ¡’¥—ßπ’È: “√≈–≈“¬∫—ø‡øÕ√å 10X PCR, Mg2Cl Ò.˘ mM,
∫à¡À≈Õ¥∑¥≈Õß„πÕà“ßπÈ”§«∫§ÿ¡Õÿ≥À¿Ÿ¡‘ ˆı Õß»“‡´≈‡´’¬ dNTPs Ò mM, ISSR primer Ò pmole, Taq DNA poly-
π“π Ò ™—Ë«‚¡ß, ‡μ‘¡ øïπÕ≈ : §≈Õ‚√øÕ√å¡ : ‰Õ‚´·Õ¡‘≈ merase Ò ¬Ÿπ‘μ, DNA template ÒÚ π“‚π°√—¡. ‡μ‘¡πÈ”
·Õ≈°ÕŒÕ≈å (Úı:ÚÙ:Ò) ˜‰¡‚§√≈‘μ√, ‡¢¬à“„Àâ “√≈–≈“¬ ‰√⇙◊ÈÕ¥’‰Õ‚Õ‰π´å „Àâ¡’ª√‘¡“μ√√«¡ Ò ‰¡‚§√≈‘μ√, À¬¥

‡ªìπ‡π◊ÈÕ‡¥’¬« 𔉪ªíòπ‡À«’ˬß∑’˧«“¡‡√Á« ÒÙ, √Õ∫μàÕπ“∑’ πÈ”¡—π·√à≈ß„πÀ≈ե撴’´“√å Ò À¬¥. π”À≈Õ¥‰ª„ à„π‡§√◊ËÕß
„™â‡«≈“ ı π“∑’, ¥Ÿ¥‡°Á∫ “√≈–≈“¬™—Èπ∫π ˆ ‰¡‚§√≈‘μ√„ à ‡æ‘Ë¡ª√‘¡“≥ “√æ—π∏ÿ°√√¡ (MJ Research √ÿàπ PCT-200
À≈Õ¥„À¡à, ‡μ‘¡§≈Õ‚√øÕ√å¡ : ‰Õ‚´·Õ¡‘≈ ·Õ≈°ÕŒÕ≈å (ÚÙ:Ò) Peltier Thermal Cycler) ‚¥¬μ—Èß‚ª√·°√¡°“√∑”ß“π¥—ßπ’È :

ˆ ‰¡‚§√≈‘μ√, ‡¢¬à“¥â«¬ vortex mixer 𔉪ªíòπ ÒÙ, Pre-denaturation ∑’Ë ˘ı Õß»“‡´≈‡´’¬ „™â‡«≈“ ı π“∑’ ®”π«π
√Õ∫μàÕπ“∑’ π“π ı π“∑’, ¥Ÿ¥‡°Á∫ “√≈–≈“¬™—Èπ∫π ı Ò √Õ∫, Denaturation ∑’Ë ˘Ù Õß»“‡´≈‡´’¬ „™â‡«≈“ Ùı «‘π“∑’,

‰¡‚§√≈‘μ√„ àÀ≈Õ¥„À¡à. ∑”°“√ °—¥´È”Õ’° Ò √Õ∫ ¥Ÿ¥‡°Á∫ Annealing ∑’Ë™à«ßÕÿ≥À¿Ÿ¡‘ ÙÛ - ˆı Õß»“‡´≈‡´’¬ „™â‡«≈“
“√≈–≈“¬™—Èπ∫π Û ‰¡‚§√≈‘μ√ „ àÀ≈Õ¥„À¡à, ‡μ‘¡ Ò π“∑’, Extension ∑’Ë ˜Ú Õß»“‡´≈‡´’¬ „™â‡«≈“ Ú π“∑’
‡Õ∑“πÕ≈≈â«π ˆ ‰¡‚§√≈‘μ√ ·≈– ·Õ¡‚¡‡π’¬¡ ·Õ´’‡∑μ ·≈– Post-extension ∑’Ë ˜Ú Õß»“‡´≈‡´’¬ „™â‡«≈“ Ò π“∑’.

˜.ı ‚¡≈“√å ˘ ‰¡‚§√≈‘μ√. 𔉪∫à¡∑’Ë -Ú Õß»“‡´≈‡´’¬ „π¢—ÈπμÕπ Annealing ‰æ√‡¡Õ√å·μà≈–™π‘¥®–∂Ÿ°∑¥ Õ∫∑’Ë
π“π Ò ™—Ë«‚¡ß ·≈â«π”À≈Õ¥¡“ªíòπ∑’Ë ÒÙ, √Õ∫μàÕπ“∑’ π“π Õÿ≥À¿Ÿ¡‘μË”°«à“°“√À≈Õ¡≈–≈“¬ (Melting temperature; Tm)
ı π“∑’, ‡∑ à«π¢Õ߇À≈«∑‘Èß, ªíòπ≈â“ßμ–°Õπ¥’‡ÕÁπ‡Õ¥â«¬ ª√–¡“≥ Û-ı Õß»“‡´≈‡´’¬ À≈—ß®“°∑”ªØ‘°‘√‘¬“æ’´’

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„Àâ·Àâß ·≈â«≈–≈“¬¥â«¬ “√≈–≈“¬∫—ø‡øÕ√å ∑’Õ’ æ’‡ÕÁ™ ¯. ¢âπ√âÕ¬≈– Ò.ı „π “√≈–≈“¬∫—æ‡øÕ√å 0.5x TBE „™â°√–· ‰ø

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‡Àπ◊Õ¡à«ß ·≈–∫—π∑÷°¿“æ·∂∫¥’‡ÕÁπ‡Õ. π” “√≈–≈“¬¥’‡ÕÁπ‡Õ “√‡§¡’ ·≈– ¿“«–°“√∑”ªØ‘°‘√‘¬“·≈–°“√·¬°·∂∫¥’‡ÕÁπ‡Õ
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