Page 34 - journal-9-2-Full
P. 34

Journal of Thai Traditional & Alternative Medicine                   Vol. 9 No. 2 September-December 2011 111



             ‡¥◊Õπ πÈ”Àπ—°‡π◊ÈÕ‡¬◊ËÕ ¥ª√–¡“≥ 5 °√—¡             ‡Õπ‰´¡å Prime Taq DNA Polymerase 5.0 U/ul 0.2

                 3. μ—«Õ¬à“߇∂“«—≈¬å‡ª√’¬ßÕâ“ßÕ‘ß DMSc Herbarium No.  ‰¡‚§√≈‘μ√, 10 mM primer 1.0 ‰¡‚§√≈‘μ√ ·≈– ¥’‡ÕÁπ‡Õ
             4568 ®“°æ‘æ‘∏¿—≥±åæ◊™°√¡«‘∑¬“»“ μ√å°“√·æ∑¬å        μ—«Õ¬à“ß 1.0 ‰¡‚§√≈‘μ√ „πªØ‘°‘√‘¬“™ÿ¥§«∫§ÿ¡„™âπÈ”°≈—Ëπ
                                                                ∫√‘ ÿ∑∏‘Ϫ≈Õ¥‡™◊ÈÕ 1.0 ‰¡‚§√≈‘μ√·∑π¥’‡ÕÁπ‡Õμ—«Õ¬à“ß
             «‘∏’«‘®—¬
                                                                        2.4 ªØ‘°‘√‘¬“æ’´’Õ“√å „™â‡§√◊ËÕß GeneAmp PCR Sys-
                 1. °“√»÷°…“ ”√«®‡∂“«—≈¬å‡ª√’¬ß®“°·À≈àßμà“ß Ê   tem 2700 (Applied Biosystems) ‚¥¬¡’ ¿“«–°“√∑”ß“π
                                                                                    o
                     ”√«®·≈–‡°Á∫μ—«Õ¬à“ß«—μ∂ÿ¥‘∫‡∂“«—≈¬å‡ª√’¬ß®“°  ¥—ßπ’È - preheating ∑’Ë 94 ´ ‡ªìπ‡«≈“ 3 π“∑’ ·≈â«∑”ªØ‘°‘√‘¬“
                                                                                                    o
             ·À≈àß∏√√¡™“μ‘μà“ß Ê „π®—ßÀ«—¥¿“§‡Àπ◊Õ ¿“§μ–«—πÕÕ°  heating-annealing-extension 10 √Õ∫ (94 ´ 1 π“∑’ ->
                                                                  o                        o            o
             ‡©’¬ß‡Àπ◊Õ ·≈–¿“§°≈“ß μ—«Õ¬à“ßμ“¡¢âÕ 1 √«¡ 19 μ—«Õ¬à“ß  50 ´ 1 π“∑’·≈–≈¥Õÿ≥À¿Ÿ¡‘≈ß 0.5 ´ ∑ÿ°√Õ∫ -> 72 ´ 1 π“∑’)
             ‡°Á∫ à«π¢Õß≈”μâπ, „∫, ¥Õ°·≈–Ωí°∑”°“√μ√«®≈—°…≥–     ®“°π—Èπ∑”ªØ‘°‘√‘¬“ heating-annealing extension Õ’° 25
                                                                       o             o           o
             ¿“¬πÕ°¢Õß≈”μâπ ¢π“¥‡∂“ ∫—π∑÷°μ“¡ ≈”μâπ, „∫, ¥Õ°, Ωí°  √Õ∫ (94 ´ 1 π“∑’ -> 42.5 ´ 1 π“∑’ -> 72 ´ 1 π“∑’) ·≈â«∫à¡
                                                                                     o                   o
             μ√«® Õ∫™π‘¥æ◊™Õ¬à“ß∂Ÿ°μâÕßμ“¡À≈—°æƒ°…Õπÿ°√¡«‘∏“π   μàÕÕ’° 5 π“∑’∑’ËÕÿ≥À¿Ÿ¡‘ 72 ´ ®“°π—Èπ‡°Á∫√—°…“‰«â∑’Ë 4 ´
             ‚¥¬ÀâÕߪؑ∫—μ‘°“√‡æ“–‡≈’Ȭ߇π◊ÈÕ‡¬◊ËÕæ◊™ ‡ª√’¬∫‡∑’¬∫°—∫    2.5 °“√∑”‡®≈Õ‘‡≈Á§‚μ√‚ø≈‘´‘ ‡æ◊ËÕ·¬°·∂∫¥’‡ÕÁπ‡Õ
             μ—«Õ¬à“ßÕâ“ßÕ‘ß (DMSc Herbarium No.4568) ®“°       „™â‡®≈·Õ°“‚√ ∑’˧«“¡‡¢â¡¢âπ 1.8% „π “√≈–≈“¬∫—ø‡øÕ√å TBE
                                                                                                              ®
             æ‘æ‘∏¿—≥±åæ◊™ °√¡«‘∑¬“»“ μ√å°“√·æ∑¬å æ∫«à“ §◊Õ Derris  ∑’˧«“¡‡¢â¡¢âπ 0.5x ‡μ‘¡ ’¬âÕ¡·∂∫¥’‡ÕÁπ‡Õ GelStar
             scandens (Roxb.) Benth.«ß»å Fabaceae - Papilionoideae  (Cambrex Bio Science Rockland, Inc.) ·≈â«·¬°·∂∫¥’
              ÿࡇ≈◊Õ° à«π¬Õ¥„∫ÕàÕπ ®“°·μà≈–μ—«Õ¬à“ß𔉪«‘‡§√“–Àå  ‡ÕÁπ‡Õ„π π“¡‰øøÑ“ 100 mV ‡ªìπ‡«≈“ª√–¡“≥ 90 π“∑’

             ≈“¬æ‘¡æ奒‡ÕÁπ‡Õ                                           2.6 ∫—π∑÷°¿“懮≈·Õ°“‚√  ‚¥¬„™â™ÿ¥∂à“¬¿“æ
                 2. °“√«‘‡§√“–Àå≈“¬æ‘¡æ奒‡ÕÁπ‡Õ                Platinum by UVItec Cambridge ·≈–«‘‡§√“–Àå¢π“¥
                    2.1 μ—«Õ¬à“ß∑’Ë∑”°“√«‘‡§√“–Àå¡’®”π«π 20 μ—«Õ¬à“ß  ¢Õß·∂∫¥’‡ÕÁπ‡Õ¥â«¬‚ª√·°√¡ UVIband version 12.11

             ª√–°Õ∫¥â«¬„∫ÕàÕπ‡∂“«—≈¬å‡ª√’¬ß·™à‡¬Áπ®”π«π 19 μ—«Õ¬à“ß  ‡°Á∫¢âÕ¡Ÿ≈®”π«π·≈–¢π“¥¢Õß·∂∫¥’‡ÕÁπ‡Õ∑’ˉ¥â 𔉪
             ·≈–‡π◊ÈÕ‡¬◊ËÕ·§≈≈—  1 μ—«Õ¬à“ß                     «‘‡§√“–À姫“¡ —¡æ—π∏å¢Õßμ—«Õ¬à“߇∂“«—≈¬å‡ª√’¬ß¥â«¬‚ª√·°√¡
                                                                        15
                    2.2  °—¥¥’‡ÕÁπ‡Õ‡∂“«—≈¬å‡ª√’¬ß ∑”‚¥¬°“√∫¥„∫ÕàÕπ  WinBoot
             2 - 3 „∫ (·≈â«·μà¢π“¥„∫) À√◊Õ‡π◊ÈÕ‡¬◊ËÕ·§≈≈—  ª√–¡“≥ 5  3. °“√æ‘ Ÿ®πå‡Õ°≈—°…≥å∑“߇§¡’¥â«¬«‘∏’‚§√¡“‚∑√°√“øï
             °√—¡πÈ”Àπ—° ¥„Àâ≈–‡Õ’¬¥ ·≈–‡μ‘¡πÈ”·¢Áß·ÀâßÀ√◊Õ‰π‚μ√‡®π  º‘«∫“ß (TLC Fingerprint) ¢Õ߇∂“«—≈¬å‡ª√’¬ß®“°·À≈àß

             ‡À≈«≈߉ª¢≥–∫¥ μ—°·∫àßμ—«Õ¬à“ß∑’Ë∫¥·≈⫪√–¡“≥ 50    μà“ß Ê ‡ª√’¬∫‡∑’¬∫°—∫‡∂“«—≈¬å‡ª√’¬ßÕâ“ßÕ‘ß
             ¡‘≈≈‘°√—¡ 𔉪 °—¥¥’‡ÕÁπ‡Õ¥â«¬™ÿ¥ °—¥¥’‡ÕÁπ‡Õ®“°æ◊™        3.1  °—¥μ—«Õ¬à“߇∂“«—≈¬å‡ª√’¬ß 1.0 °√—¡¥â«¬‡Õ∑“-
                      TM
             UltraClean  Plant DNA Isolation Kit (MO BIO Labo-  πÕ≈®”π«π 20 ¡‘≈≈‘≈‘μ√ ‚¥¬«‘∏’√’ø≈—°´å∫πÕà“߉ÕπÈ” 90
             ratories, Inc.) μ“¡¢—ÈπμÕπ°“√„™âß“πº≈‘μ¿—≥±å μ—«Õ¬à“ß  Õß»“‡´≈‡´’¬  π“π 20 π“∑’ °√Õߢ≥–√âÕπ π” “√∑’Ë°√Õ߉¥â
                                    o
              à«π∑’ˇÀ≈◊Õ‡°Á∫∑’ËÕÿ≥À¿Ÿ¡‘ -20 ´                  ‰ª√–‡À¬®π·Àâߥ⫬‡§√◊ËÕß ÿ≠≠“°“»∑’ËÕÿ≥À¿Ÿ¡‘ 50 Õß»“

                    2.3 𔥒‡ÕÁπ‡Õ∑’Ë °—¥‰¥â‰ª„™â„πªØ‘°‘√‘¬“æ’´’Õ“√å √à«¡  ‡´≈‡´’¬  ≈–≈“¬ “√∑’ˉ¥â¥â«¬‡Õ∑“πÕ≈®”π«π 3.0 ¡‘≈≈‘≈‘μ√
             °—∫°“√„™â‡∑§π‘§ ISSR (Inter Simple Sequence Repeat)  „™âÀ≈Õ¥√Ÿ‡≈Á° (capillary tube) ¥Ÿ¥ “√∑’ˉ¥â·μâ¡≈ß„π·ºàπ
             ‚¥¬„™â primer ®”π«π 12 primer ´÷Ëß primer M15 ‡ªìπ  ´‘≈‘°“‡®≈ μ—«Õ¬à“ß≈– 5 ‰¡‚§√≈‘μ√

             primer ∑’Ë¥’∑’Ë ÿ¥ ¡’≈”¥—∫‡∫ ‡ªìπ 5′-GAAT GAAT GAAT        3.2 πÈ”¬“·¬°„™â§≈Õ‚√øÕ√å¡ ‡¡∑“πÕ≈ πÈ”·≈–°√¥
             GAAT-3′ ·≈–¡’ à«πº ¡¢Õߪؑ°‘√‘¬“æ’´’Õ“√å „πª√‘¡“μ√ 10  ·Õ´‘μ‘°„πÕ—μ√“ à«π 80:30:5:1
             ‰¡‚§√≈‘μ√ ¥—ßπ’È πÈ”°≈—Ëπ∫√‘ ÿ∑∏‘Ϫ≈Õ¥‡™◊ÈÕ 5.8 ‰¡‚§√≈‘μ√, 10X  3.3 °“√μ√«® Õ∫ π”·ºàπ´‘≈‘°“‡®≈‰ªæàπ¥â«¬

             PCR buffer 1.0 ‰¡‚§√≈‘μ√, 100 mM dNTP 1.0 ‰¡‚§√≈‘μ√,   “√≈–≈“¬ 20% °√¥°”¡–∂—π „π‡Õ∑“πÕ≈ ∑‘È߉«â„Àâ·Àâß
   29   30   31   32   33   34   35   36   37   38   39